本文是学习GB-T 32986-2016 化妆品中多西拉敏等9种抗过敏药物的测定 液相色谱-串联质谱法. 而整理的学习笔记,分享出来希望更多人受益,如果存在侵权请及时联系我们
本标准规定了化妆品中多西拉敏、美沙吡林、曲吡那敏、溴苯那敏、苯海拉明、赛克利嗪、二苯拉林、
羟嗪和氯苯沙明含量的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS) 测定方法。
本标准适用于膏霜乳液、水剂类化妆品中多西拉敏、美沙吡林、曲吡那敏、溴苯那敏、苯海拉明、赛克
利嗪、二苯拉林、羟嗪和氯苯沙明含量的测定。
本标准的检出限和定量限:9种抗过敏药物的检出限均为0.6μg/kg,定量限均为2.0
μg/kg。
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GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
样品用三氯乙酸溶液超声提取、离心后,上清液经固相萃取小柱净化,用液相色谱-串联质谱测定和
确证,外标法定量。
除非另有说明,所有试剂均为分析纯,水为 GB/T 6682规定的一级水。
3.2.7 10%甲醇水溶液:准确移取10 mL 甲醇于100 mL
容量瓶中,用水定容至刻度,混匀后备用。
3.2.8 1%三氯乙酸溶液:准确称取1.00 g 三氯乙酸于100 mL
容量瓶中,用水溶解并定容至刻度。
3.2.9 5%氨水甲醇溶液:准确移取5 mL 氨水于100 mL
容量瓶中,用甲醇(3.2.1)定容至刻度,混匀后 备用。
3.2.10 聚苯乙烯-二乙烯基苯共聚物阳离子交换小柱:60 mg,3mL,
或相当者。使用前依次用3 mL
甲醇、3 mL 水活化。
3.2.11 微孔滤膜:0.22 μm, 有机相。
3.2.12
标准品:多西拉敏、美沙吡林、曲吡那敏、溴苯那敏、苯海拉明、赛克利嗪、二苯拉林、羟嗪和氯苯
GB/T 32986—2016
沙明的中文名称、英文名称、CAS 登录号、分子式、相对分子质量及结构式参见表
A.1, 纯度不小
于 9 8 % 。
3.2.13 标准储备液:准确称取各标准品(3.2.12)适量分别置于9个50 mL
容量瓶中,用甲醇水溶液 (3.2.7)溶解并定容至刻度,配制成浓度为100 mg/L
的标准储备液,于4℃避光保存,有效期2个月。
3.2.14 混合标准工作中间液:分别准确移取各标准储备液(3.2.13)1 mL
于100 mL 容量瓶中,用甲醇 水溶液(3.2.7)定容至刻度,配制成浓度为1 mg/L
的混合标准工作液,现配现用。
3.3.1 液相色谱-串联质谱仪(LC-MS/MS): 配有电喷雾离子源(ESI)。
3.3.2 电子天平:感量为0.0001 g 和0.01 g。
3.3.3 离心机:转速不低于10000 r/min。
3.3.8 具塞塑料离心管:15 mL。
3.4.1.1 **膏霜乳液类化妆品(水包油
称取试样约0.5g (精确至0.0001g)于15mL 具塞塑料离心管中,加入8mL
三氯乙酸溶液(3.2.8)和 0.5g 氯化钠,涡旋分散均匀后,超声提取20 min,
恢复至室温后用三氯乙酸溶液(3.2.8)定容至10 mL,
混匀,以10000 r/min 离心10 min, 准确移取5 mL 上清液,加入5 mL
水混匀后做待净化液。
3.4.1.2 **膏霜乳液类化妆品(油包水
称取试样约0.5 g (精确至0.0001 g)于15 mL 具塞塑料离心管中,加入3 mL
正己烷(3.2.3),涡旋 分散均匀后,准确加入10 mL
三氯乙酸溶液(3.2.8),超声提取20 min 后,以10000 r/min 离心10 min,
弃去上层正己烷后,准确移取5 mL 下层提取液,加入5 mL 水混匀后做待净化液。
3.4.1.3 水剂类化妆品
称取试样约0.5 g (精确至0.0001 g)于 1 5 mL
具塞塑料离心管中,用三氯乙酸溶液(3.2.8)定容至
10mL, 超声提取20 min, 准确移取5 mL 提取液,加入5 mL 水混匀后做待净化液。
将3.4.1 中的待净化液转移至固相萃取小柱(3.2.10)中,依次用3 mL 水 和 3 mL
甲醇洗涤,减压抽 干后,用5 mL
氨水甲醇溶液(3.2.9)洗脱,收集洗脱液,整个萃取过程控制流速约为1 mL/min。
在 40℃水浴中用氮气吹干,加入1.0 mL 初始比例流动相,在涡旋混合器上混合1
min 后,过微孔滤膜
(3.2.11),滤液待测。
液相色谱参考条件如下:
GB/T 32986—2016
a) 色谱柱:Cis柱,100 mm×2.1mm(i.d.),5μm, 或相当者。
b) 流动相:A: 甲醇,B:0.1% 甲酸溶液(含5.0 mmol/L
甲酸铵),梯度洗脱,梯度条件见表1。
c) 柱温:30℃。
d) 进样量:5μL。
表 1 梯度洗脱程序表
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串联质谱参考条件如下:
a) 电离方式:电喷雾电离,正离子模式;
b) 喷雾电压:3.0 kV;
c) 雾化温度:300℃;
d) 毛细管温度:350℃;
e) 鞘气压力:45 Arb(1Arb=6.895 kPa);
f) 辅助气压力:15 Arb(1 Arb=0.33L/min);
g) 碰撞气、鞘气和辅助气:氩气(99.999%);
h) 扫描模式:多反应监测(MRM) 模式,9种抗过敏药物的质谱参数见表2。
表 2 质谱参数
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GB/T 32986—2016
表 2 ( 续 )
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用初始比例流动相溶液将混合标准工作中间液(3.2.14)逐级稀释得到浓度为0.5
ng/mL 、1.0 ng/mL、 2.0 ng/mL 、5.0 ng/mL 、10.0 ng/mL
的混合标准工作液,浓度由低到高进行检测,以定量子离子峰面积
对质量浓度作图,做出标准曲线回归方程。
9种抗过敏药物标准物质色谱图参见图B.2。
样品待测液中各组分的响应值应在标准曲线的线性范围内,超过线性范围则应稀释后再进样测定。
在相同条件测定样品溶液和标准溶液,如果样品溶液中检出的色谱峰的保留时间与标准溶液中的
某种组分峰的保留时间一致(变化范围在±2.5%),并且所选择的两对子离子的质荷比一致,样品溶液
中定性离子相对丰度与浓度相当标准工作溶液中定性离子的相对丰度进行比较时,相对偏差不超过
表3规定的范围,则可判断样品中存在该组分。
9种抗过敏药物标准物质选择离子质量色谱图参见图 B. 1。
表 3 定性确定时相对离子丰度的最大允许偏差
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除不加试样外,均按上述测定条件和步骤进行。
结果按式(1)计算,计算结果保留小数点后两位。
style="width:2.13989in;height:0.63998in" /> (1)
式中:
X:— 样品中某种组分含量,单位为微克每千克(μg/kg);
C,—— 由标准曲线得出的测试液中某种组分的浓度,单位为纳克每毫升(ng/mL);
GB/T 32986—2016
V — 定容体积,单位为毫升(mL);
K ——稀释倍数;
m — 样品质量,单位为克(g)。
在添加浓度2.0 μg/kg~10.0μg/kg
浓度范围内,回收率在90%~110%之间,相对标准偏差小
于10%。
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。
GB/T 32986—2016
(资料性附录)
9种抗过敏药物的中文名称、英文名称、CAS
登录号、分子式、相对分子质量及结构式
表 A.1 9 种抗过敏药物的中文名称、英文名称、CAS
登录号、分子式、相对分子质量及结构式
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GB/T 32986—2016
表 A.1 ( 续)
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style="width:5.03325in;height:7.65996in" />GB/T 32986—2016
9 种 抗 过 敏 药 物 标 准 物
质 色 谱 图 和 选 择 离 子 质
量 色 谱 图
style="width:5.72662in;height:7.67338in" />
t/min
说明:
2——美沙吡林;
4——溴苯那敏;
5——苯海拉明;
6——赛克利嗪;
8——羟嗪;
图 B.1 9 种 抗 过 敏 药 物 标
准 物 质 选 择 离 子 质 量 色
谱 图
style="width:3.1067in" />GB/T 32986—2016
style="width:11.70009in;height:7.64676in" />
保留时间/min
说明:
1——多西拉敏;
5——苯海拉明;
6—-赛克利嗪;
7——二苯拉林;
8——羟嗪;
9——氯苯沙明。
图 B.2 9 种抗过敏药物标准物质色谱图
更多内容 可以 GB-T 32986-2016 化妆品中多西拉敏等9种抗过敏药物的测定 液相色谱-串联质谱法. 进一步学习